目錄
叢書(shū)序
前言
第一章病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)概論 1
第一 病毒學(xué)常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡(jiǎn)介 1
一、病毒的分離與鑒定 1
二、病毒毒力測(cè)定 2
三、病毒理化特性測(cè)定 2
四、病毒中和試驗(yàn) 2
五、病毒純化 2
六、病毒載體 2
第二 病毒生物安全和防護(hù)技術(shù) 3
一、實(shí)驗(yàn)室的分級(jí)及病原微生物分類(lèi) 3
二、實(shí)驗(yàn)人員個(gè)人防護(hù)要求 3
三、實(shí)驗(yàn)人員消毒滅菌應(yīng)遵循的原則 4
四、實(shí)驗(yàn)室常用消毒劑 4
五、實(shí)驗(yàn)室常用消毒滅菌方法 6
六、實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中的應(yīng)急處置預(yù)案 8
七、生物安全柜內(nèi)操作要求 8
本章思考題 9
主要參考文獻(xiàn) 9
第二章病毒的培養(yǎng)與收獲 11
第一 病毒的雞胚接種、培養(yǎng)和收獲 11
一、病毒卵黃囊接種的方法及培養(yǎng)和收獲 12
二、尿囊絨毛膜接種 13
三、雞胚尿囊腔接種 15
第二 病毒的原代細(xì)胞接種、培養(yǎng)和收獲 16
一、原代細(xì)胞的培養(yǎng) 16
二、病毒的接種與培養(yǎng) 18
三、病毒的收獲 18
第三 病毒的傳代細(xì)胞接種、培養(yǎng)和收獲 18
一、貼壁接種 19
二、細(xì)胞懸浮接種 19
三、病毒液的收獲 19
本章思考題 19
主要參考文獻(xiàn) 19
第三章病毒的濃縮與純化 21
第一 物理法 21
一、超速離心法 21
二、吸附法 24
三、電泳法 24
四、超濾法 25
第二 化學(xué)法 25
一、中性鹽沉淀法 25
二、聚乙二醇沉淀法 26
三、有機(jī)溶劑沉淀法 26
四、等電點(diǎn)沉淀法 27
五、兩相溶劑間分配系數(shù)法 27
第三 層析法 28
一、離子交換層析 28
二、分子篩層析 29
三、親和層析 30
本章思考題 31
主要參考文獻(xiàn) 31
第四章病毒致細(xì)胞病變效應(yīng)觀(guān)察 33
第一 噬斑 34
一、噬斑測(cè)定的原理 34
二、噬斑形成試驗(yàn)和觀(guān)察方法（雙層瓊脂平板法） 34
第二 空斑 35
一、空斑形成試驗(yàn)的原理 35
二、空斑形成試驗(yàn)和觀(guān)察方法（以小鼠肝炎病毒為例） 35
第三 病毒包涵體 36
一、吉姆薩染色的原理 37
二、病毒包涵體形成試驗(yàn)和觀(guān)察方法 37
第四 合胞體 38
一、合胞體形成的原理 38
二、合胞體形成試驗(yàn)和觀(guān)察方法 38
本章思考題 38
主要參考文獻(xiàn) 39
第五章病毒的紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)和紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn) 40
第一 紅細(xì)胞吸附試驗(yàn) 40
一、病毒易感細(xì)胞培養(yǎng) 41
二、接種病毒 41
三、紅細(xì)胞吸附 41
四、結(jié)果觀(guān)察和判斷 41
第二 紅細(xì)胞凝集試驗(yàn) 41
一、紅細(xì)胞懸液制備 42
二、病毒液的倍比稀釋 42
三、加入紅細(xì)胞懸液 43
四、結(jié)果觀(guān)察和判斷 43
第三 紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn) 44
一、試驗(yàn)前準(zhǔn)備 44
二、血清的倍比稀釋 44
三、加入病毒液 45
四、加入紅細(xì)胞懸液 45
五、結(jié)果觀(guān)察和判斷 45
本章思考題 45
主要參考文獻(xiàn) 46
第六章病毒定量及感染力測(cè)定 47
第一 空斑形成單位的計(jì)算 48
一、基本概念和實(shí)驗(yàn)原理 48
二、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 48
三、實(shí)驗(yàn)方法（以?6?孔細(xì)胞板為例） 48
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 49
第二 半數(shù)組織培養(yǎng)感染量（TCID50）的計(jì)算 49
一、基本概念和實(shí)驗(yàn)原理 49
二、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 49
三、實(shí)驗(yàn)方法（以?40?孔塑料組織培養(yǎng)板接種為例） 49
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 50
第三 雞胚半數(shù)感染量（EID50）的計(jì)算 51
一、基本概念和實(shí)驗(yàn)原理 51
二、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 51
三、實(shí)驗(yàn)方法（以流感病毒為例） 51
第四 半數(shù)致死量（LD50）的計(jì)算 52
一、基本概念和實(shí)驗(yàn)原理 52
二、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 52
三、實(shí)驗(yàn)方法 52
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 52
第五 血凝單位（HAU）的計(jì)算 53
一、基本概念和實(shí)驗(yàn)原理 53
二、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 53
三、實(shí)驗(yàn)方法 53
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 53
本章思考題 54
主要參考文獻(xiàn) 54
第七章病毒檢測(cè)技術(shù) 55
第一 基因組檢測(cè) 55
一、核酸電泳 55
二、核酸雜交 58
三、核酸擴(kuò)增 61
四、基因芯片 64
五、基因測(cè)序 65
第二 抗原檢測(cè) 67
一、免疫熒光技術(shù) 67
二、酶聯(lián)免疫吸附分析 68
三、顆粒凝集試驗(yàn) 70
四、蛋白質(zhì)印跡法 71
五、免疫親和層析法 73
六、放射免疫分析 74
第三 抗體檢測(cè) 77
一、中和試驗(yàn) 77
二、紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn) 77
三、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) 77
四、酶聯(lián)免疫吸附分析 79
五、蛋白質(zhì)印跡法 80
六、免疫放射分析 80
第四 指示細(xì)胞系技術(shù) 81
一、指示細(xì)胞系技術(shù)平臺(tái)的建立 82
二、指示細(xì)胞系的應(yīng)用 84
本章思考題 84
主要參考文獻(xiàn) 84
第八章病毒中和試驗(yàn) 86
第一 基本原理 86
第二 測(cè)定方法 87
一、終點(diǎn)法中和試驗(yàn) 87
二、空斑減數(shù)法中和試驗(yàn) 89
三、交叉保護(hù)法中和試驗(yàn) 90
本章思考題 91
主要參考文獻(xiàn) 91
第九章病毒的電子顯微鏡觀(guān)察 92
第一 掃描電子顯微鏡 92
一、樣品制備 93
二、掃描電子顯微鏡拍攝與分析 93
第二 透射電子顯微鏡 93
一、病毒樣品的超薄切片技術(shù) 94
二、負(fù)染色病毒樣品透射電子顯微成像 95
三、病毒免疫電鏡技術(shù) 96
四、病毒樣品的冷凍電鏡技術(shù) 97
第三 掃描透射電子顯微鏡 100
一、樣品制備 100
二、透射電子顯微鏡觀(guān)察 101
本章思考題 101
主要參考文獻(xiàn) 101
第十章病毒成像示蹤技術(shù) 102
第一 病毒的熒光蛋白成像示蹤 103
一、熒光蛋白概述 103
二、常見(jiàn)熒光蛋白簡(jiǎn)介 103
三、病毒蛋白融合熒光蛋白的策略及案例 104
第二 病毒的量子點(diǎn)成像示蹤 106
一、量子點(diǎn)概述 106
二、量子點(diǎn)標(biāo)記病毒的策略 106
本章思考題 109
主要參考文獻(xiàn) 109
第十一章工程病毒載體 110
第一 腺病毒載體 111
一、腺病毒概述 111
二、腺病毒載體研究概況 111
三、復(fù)制缺陷型、復(fù)制型和靶向性重組腺病毒載體 111
四、常用復(fù)制缺陷型重組腺病毒包裝系統(tǒng) 112
五、實(shí)驗(yàn)方案 113
六、注意事項(xiàng) 114
第二 桿狀病毒載體 114
一、桿狀病毒分類(lèi) 114
二、桿狀病毒生物學(xué)特性 114
三、桿狀病毒載體概述 115
四、常用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)成 116
五、實(shí)驗(yàn)方案 117
六、注意事項(xiàng) 117
第三 腺相關(guān)病毒載體 117
一、腺相關(guān)病毒概述 117
二、腺相關(guān)病毒載體概述 118
三、腺相關(guān)病毒包裝系統(tǒng) 118
四、實(shí)驗(yàn)方案 118
五、注意事項(xiàng) 119
第四 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體與慢病毒載體 119
一、逆轉(zhuǎn)錄病毒與慢病毒概述 119
二、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體概述 120
三、慢病毒載體概述 120
四、逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒包裝系統(tǒng) 120
五、實(shí)驗(yàn)方案 121
六、注意事項(xiàng) 122
第五 痘病毒載體 122
一、痘病毒概述 122
二、痘病毒載體概述 122
三、痘病毒包裝系統(tǒng) 123
四、實(shí)驗(yàn)方案 123
五、注意事項(xiàng) 125
第六 RNA?病毒反向遺傳學(xué)技術(shù) 125
一、RNA?病毒反向遺傳學(xué)概述 125
二、RNA?病毒反向遺傳系統(tǒng)的構(gòu)建原則 126
三、寨卡病毒反向遺傳系統(tǒng) 127
四、實(shí)驗(yàn)方案 127
五、注意事項(xiàng) 128
本章思考題 128
主要參考文獻(xiàn) 129
第十二章病毒抗原制備 130
第一 病毒抗原概述 130
一、病毒抗原及其應(yīng)用 130
二、病毒抗原的制備歷史 131
第二 病毒抗原制備技術(shù) 132
一、病毒抗原表達(dá)系統(tǒng) 132
二、病毒抗原的純化技術(shù) 135
本章思考題 137
主要參考文獻(xiàn) 137
第十三章病毒基因組的生物信息學(xué)分析 139
第一 病毒組學(xué)分析和新病原發(fā)現(xiàn) 139
一、病毒宏基因組的數(shù)據(jù)處理和組裝 139
二、病毒的發(fā)現(xiàn)和分類(lèi) 140
三、病毒基因組的完善與功能注釋 141
四、病毒組的生態(tài)學(xué)比較 142
第二 病毒的進(jìn)化分析 142
一、病毒進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建 143
二、病毒基因組的重組分析 143
三、病毒適應(yīng)性進(jìn)化分析 144
四、病毒和宿主間相互關(guān)系分析 144
第三 病毒的生態(tài)學(xué)和分子流行病學(xué)分析 144
一、分子鐘模型的檢驗(yàn)和分歧時(shí)間的估計(jì) 144
二、地理傳播分析 145
三、病毒的種群遺傳學(xué)分析 146
本章思考題 147
主要參考文獻(xiàn) 147