目錄
第三版前言
第一章 細(xì)胞生物學(xué)研究方法概述 1
第一節(jié) 細(xì)胞制片方法 1
第二節(jié) 細(xì)胞化學(xué)技術(shù) 3
第三節(jié) 細(xì)胞獲取與分離方法 4
第四節(jié) 細(xì)胞工程技術(shù) 7
第五節(jié) 基因編輯技術(shù) 14
第六節(jié) 單細(xì)胞測序技術(shù) 15
第七節(jié) 細(xì)胞代謝組學(xué)分析方法 16
第八節(jié) 細(xì)胞能量代謝分析 18
第九節(jié) 活細(xì)胞成像技術(shù) 21
第二章 細(xì)胞生物學(xué)諾貝爾獎研究發(fā)現(xiàn)之旅 23
第一節(jié) 細(xì)胞感知和適應(yīng)氧變化機制發(fā)現(xiàn)之旅 23
第二節(jié) T細(xì)胞表面的免疫負(fù)調(diào)節(jié)分子發(fā)現(xiàn)之旅 24
第三節(jié) 細(xì)胞自噬機制發(fā)現(xiàn)之旅 26
第四節(jié) 構(gòu)成大腦定位系統(tǒng)的細(xì)胞發(fā)現(xiàn)之旅 27
第五節(jié) 細(xì)胞囊泡運輸系統(tǒng)及其調(diào)控機制發(fā)現(xiàn)之旅 29
第六節(jié) 細(xì)胞重編程及誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞發(fā)現(xiàn)之旅 31
第七節(jié) 染色體端粒及端粒酶對染色體的保護(hù)機制發(fā)現(xiàn)之旅 32
第八節(jié) 器官發(fā)育和程序性細(xì)胞死亡的基因調(diào)節(jié)發(fā)現(xiàn)之旅 33
第九節(jié) 蛋白質(zhì)地址簽的發(fā)現(xiàn)之旅 35
第十節(jié) G蛋白及其在細(xì)胞中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用發(fā)現(xiàn)之旅 36
第十一節(jié) 蛋白質(zhì)可逆磷酸化作用的生物調(diào)節(jié)機制發(fā)現(xiàn)之旅 37
第三章 細(xì)胞生物學(xué)先進(jìn)儀器設(shè)備 39
第一節(jié) 細(xì)胞觀察及形態(tài)分析設(shè)備 39
第二節(jié) 細(xì)胞分選設(shè)備 52
第三節(jié) 細(xì)胞制片設(shè)備 57
第四節(jié) 細(xì)胞破碎設(shè)備 60
第五節(jié) 細(xì)胞活力檢測設(shè)備 62
第四章 基礎(chǔ)性實驗 66
第一節(jié) 細(xì)胞制片及染色觀察 66
實驗1 血細(xì)胞涂片的制備及染色觀察 66
實驗2 植物葉片組織徒手切片的制備及觀察 68
實驗3 動物組織冰凍切片的制備及染色觀察 69
第二節(jié) 細(xì)胞獲取與分離 70
實驗4 研磨低滲法分離小鼠脾臟單個核細(xì)胞 70
實驗5 酶解法制備植物原生質(zhì)體 72
實驗6 密度梯度離心法分離外周血單個核細(xì)胞 74
實驗7 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的富集與分離 75
第三節(jié) 細(xì)胞器和細(xì)胞組分顯示 76
實驗8 植物細(xì)胞線粒體和液泡的超活染色及觀察 76
實驗9 酸性磷酸酶法顯示巨噬細(xì)胞溶酶體 78
實驗10 牛蛙胸骨劍突軟骨細(xì)胞高爾基體的中性紅染色 79
實驗11 細(xì)胞中過氧化物酶體的顯示 80
實驗12 細(xì)胞中多糖和游離脂的顯示 82
實驗13 經(jīng)典細(xì)胞化學(xué)法顯示細(xì)胞DNA和RNA 83
實驗14 考馬斯亮藍(lán)染色法顯示細(xì)胞骨架 85
第四節(jié) 細(xì)胞大小測量與細(xì)胞計數(shù) 88
實驗15 細(xì)胞大小的顯微測量 88
實驗16 細(xì)胞計數(shù) 89
第五節(jié) 細(xì)胞生理 91
實驗17 哺乳動物紅細(xì)胞膜的通透性檢測 91
實驗18 植物細(xì)胞質(zhì)壁分離現(xiàn)象觀察及質(zhì)壁分離法測定基態(tài)滲透勢 93
實驗19 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象觀察及吞噬活性檢測 94
實驗20 細(xì)胞運動觀察實驗 96
實驗21 臺盼藍(lán)染色法鑒別死活細(xì)胞 98
第六節(jié) 細(xì)胞分裂 99
實驗22 壓片法制備植物細(xì)胞分裂標(biāo)本及顯微觀察 99
實驗23 花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂標(biāo)本制備 101
實驗24 滴片法制備懸浮細(xì)胞分裂標(biāo)本 102
實驗25 去壁低滲法制備植物細(xì)胞染色體分散標(biāo)本 105
第七節(jié) 細(xì)胞裂解及效果檢測 106
實驗26 小鼠腹水瘤細(xì)胞裂解及乳酸脫氫酶活性檢測 107
第八節(jié) 細(xì)胞器分離 108
實驗27 植物細(xì)胞葉綠體的分離 109
實驗28 動物細(xì)胞線粒體的分離 110
實驗29 胞外囊泡提取 112
第五章 綜合性實驗 115
第一節(jié) 細(xì)胞分選 115
實驗30 免疫磁珠分選法分離小鼠脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞 115
實驗31 T細(xì)胞的免疫熒光標(biāo)記及流式細(xì)胞儀分選實驗 117
第二節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞融合 119
實驗32 貼壁細(xì)胞的原代培養(yǎng)實驗 120
實驗33 貼壁細(xì)胞的傳代培養(yǎng)實驗 122
實驗34 小鼠骨髓單個核細(xì)胞集落形成實驗 124
實驗35 PEG介導(dǎo)的細(xì)胞融合實驗 125
第三節(jié) 細(xì)胞凍存與復(fù)蘇 127
實驗36 細(xì)胞凍存與解凍復(fù)蘇實驗 128
第四節(jié) 細(xì)胞增殖與活力檢測 130
實驗37 MTT比色法檢測細(xì)胞增殖與活力 131
實驗38 CCK8法檢測細(xì)胞增殖與活力 132
實驗39 ATP生物熒光法檢測羥基喜樹堿對腹水瘤細(xì)胞活力的影響 134
第五節(jié) 免疫細(xì)胞化學(xué) 136
實驗40 免疫熒光法顯示細(xì)胞骨架 136
實驗41 酶免疫細(xì)胞化學(xué)法顯示小鼠脾臟淋巴細(xì)胞 138
第六節(jié) 細(xì)胞黏附與遷移分析實驗 140
實驗42 腫瘤細(xì)胞黏附能力分析實驗 140
實驗43 檢測腫瘤細(xì)胞侵襲能力的Transwell小室實驗 142
實驗44 腫瘤細(xì)胞遷移的劃痕實驗 143
第七節(jié) 細(xì)胞的激活及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子檢測 145
實驗45 利用鈣離子熒光探針檢測細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度 145
實驗46 信號蛋白磷酸化水平檢測實驗 147
實驗47 轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活性檢測實驗 149
第八節(jié) 哺乳動物細(xì)胞轉(zhuǎn)基因及表達(dá)檢測 151
實驗48 綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的小鼠成纖維細(xì)胞及表達(dá)檢測 152
第九節(jié) 細(xì)胞周期調(diào)控與檢測 154
實驗49 利用流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期時相 155
實驗50 細(xì)胞周期蛋白D1基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞及細(xì)胞周期檢測 157
實驗51 胸腺嘧啶脫氧核苷（TdR）雙阻斷法同步化培養(yǎng)的動物細(xì)胞 159
實驗52 秋水仙胺阻抑法分離貼壁培養(yǎng)的哺乳動物M期細(xì)胞 160
實驗53 植物細(xì)胞中期同步化誘導(dǎo) 161
第十節(jié) 分裂細(xì)胞微核的誘導(dǎo)與檢測（細(xì)胞遺傳毒性） 162
實驗54 蠶豆根尖細(xì)胞微核的誘導(dǎo)與檢測 163
實驗55 小鼠骨髓多染性紅細(xì)胞的誘導(dǎo)與檢測 164
實驗56 小鼠精巢細(xì)胞微核的誘導(dǎo)與檢測 166
第六章 探究性實驗 169
第一節(jié) 腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡及檢測 169
實驗57 涂片染色法檢測凋亡細(xì)胞 169
實驗58 利用激光共聚焦顯微鏡及流式細(xì)胞儀檢測Annexin V-FITC/PI染色的凋亡細(xì)胞 171
實驗59 凋亡細(xì)胞DNA的梯狀條帶電泳 172
實驗60 TUNEL技術(shù)原位檢測顯示凋亡實體瘤細(xì)胞 175
第二節(jié) 細(xì)胞自噬的誘導(dǎo)及檢測 177
實驗61 MDC染色法檢測饑餓法誘導(dǎo)自噬的巨噬細(xì)胞 178
實驗62 GFP-LC3基因轉(zhuǎn)染法顯示無血清饑餓法誘導(dǎo)形成的自噬體 180
第三節(jié) 細(xì)胞衰老的誘導(dǎo)與檢測 181
實驗63 H2O2誘導(dǎo)細(xì)胞衰老及胞內(nèi)衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶檢測 182
實驗64 衰老細(xì)胞ROS的流式細(xì)胞儀檢測 183
第四節(jié) 細(xì)胞分化的誘導(dǎo)及檢測 185
實驗65 骨髓造血干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化實驗 187
實驗66 維甲酸誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化及檢測實驗 189
第五節(jié) 基因沉默與編輯 191
實驗67 RNA干擾沉默綠色熒光蛋白基因 193
實驗68 CRISPR-Cas9技術(shù)定向敲除哺乳動物細(xì)胞基因 194
第六節(jié) 細(xì)胞端粒酶活性檢測實驗 198
實驗69 腫瘤細(xì)胞的端粒酶活性檢測 199
附錄 202
附錄一 常用溶液配制方法 202
附錄二 腹水瘤小鼠模型建立方法 203
附錄三 細(xì)胞培養(yǎng)前的準(zhǔn)備工作 204
附錄四 細(xì)胞生物學(xué)實驗教學(xué)方法案例 206