模塊一動物細胞培養(yǎng)的準備 001
【背景描述】 001
【學習目標】 001
【模塊任務】 002
任務1-1動物細胞培養(yǎng)器材的準備 002
● 必備知識 002
一、動物細胞培養(yǎng)的基本概念及優(yōu)缺點 002
二、動物細胞培養(yǎng)的環(huán)境條件 005
三、動物細胞培養(yǎng)實驗室的設計與布局 006
四、動物細胞培養(yǎng)設備 007
五、動物細胞培養(yǎng)用品 011
● 操作規(guī)程 016
一、動物細胞培養(yǎng)常用設備的使用 016
二、動物細胞培養(yǎng)用品的清洗、包裝和滅菌 018
任務1-2動物細胞培養(yǎng)用液的準備 020
● 必備知識 020
一、培養(yǎng)細胞的營養(yǎng)需要 020
二、動物細胞培養(yǎng)用液 022
三、動物細胞培養(yǎng)常用的消毒和無菌處理方法 028
四、動物細胞培養(yǎng)工作的基本要求和工作方法 030
● 操作規(guī)程 032
一、動物細胞培養(yǎng)用液的配制和無菌處理 032
二、動物細胞培養(yǎng)的無菌操作 034
【拓展知識】 035
一、動物細胞培養(yǎng)發(fā)展史 035
二、動物細胞培養(yǎng)的應用 037
三、動物細胞培養(yǎng)的其他常用液 039
【鞏固提升】 040
一、鞏固練習 040
二、進階訓練 042

模塊二動物細胞的原代培養(yǎng) 043
【背景描述】 043
【學習目標】 043
【模塊任務】 044
任務2-1組織塊法培養(yǎng)雞胚成纖維細胞 044
● 必備知識 044
一、培養(yǎng)細胞的細胞生物學 044
二、培養(yǎng)細胞的取材 051
三、組織塊培養(yǎng)法 052
四、培養(yǎng)細胞的觀察和檢測技術(shù) 054
● 操作規(guī)程 059
一、雞胚成纖維細胞的原代培養(yǎng)（組織塊法） 059
二、體外培養(yǎng)細胞的常規(guī)觀察 061
任務2-2消化法培養(yǎng)雞胚成纖維細胞 062
● 必備知識 062
一、組織材料的分離 062
二、消化培養(yǎng)法 064
三、細胞計數(shù) 065
● 操作規(guī)程 066
雞胚成纖維細胞的原代培養(yǎng)（消化法） 066
【拓展知識】 068
一、動物正常組織細胞的培養(yǎng) 068
二、腫瘤細胞培養(yǎng) 071
【鞏固提升】 075
一、鞏固練習 075
二、進階訓練 076

模塊三動物細胞的傳代、凍存和復蘇 077
【背景描述】 077
【學習目標】 077
【模塊任務】 078
任務3-1雞胚成纖維細胞的傳代培養(yǎng) 078
● 必備知識 078
一、動物細胞傳代培養(yǎng)技術(shù) 078
二、細胞系的維持 080
● 操作規(guī)程 080
雞胚成纖維細胞的傳代 080
任務3-2雞胚成纖維細胞的凍存和復蘇 082
● 必備知識 082
一、細胞凍存技術(shù) 082
二、細胞復蘇技術(shù) 084
三、細胞活性檢查方法 084
● 操作規(guī)程 086
一、雞胚成纖維細胞的凍存 086
二、雞胚成纖維細胞的復蘇 087
三、雞胚成纖維細胞的活性檢查 088
【拓展知識】 089
一、培養(yǎng)細胞的運輸和短期保存 089
二、干細胞培養(yǎng) 090
三、三維細胞培養(yǎng) 093
【鞏固提升】 096
一、鞏固練習 096
二、進階訓練 097

模塊四動物細胞的大規(guī)模培養(yǎng) 098
【背景描述】 098
【學習目標】 098
【模塊任務】 099
任務4-1CHO細胞大規(guī)模貼壁培養(yǎng) 099
● 必備知識 099
一、動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)的一般工藝流程 099
二、動物細胞大規(guī)模貼壁培養(yǎng)常用的方法 099
● 操作規(guī)程 104
發(fā)酵罐大規(guī)模貼壁培養(yǎng)CHO細胞 104
任務4-2CHO細胞大規(guī)模懸浮培養(yǎng) 108
● 必備知識 108
一、動物細胞大規(guī)模懸浮培養(yǎng)技術(shù) 108
二、動物細胞培養(yǎng)反應器 109
三、動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)的操作方式 116
● 操作規(guī)程 118
一次性生物反應器大規(guī)模懸浮培養(yǎng)CHO細胞 118
【拓展知識】 121
一、動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)常用細胞系 121
二、細胞生物反應器放大技術(shù) 123
三、動物細胞固定化培養(yǎng) 126
【鞏固提升】 127
一、鞏固練習 127
二、進階訓練 129

模塊五單克隆抗體生產(chǎn)細胞的制備 130
【背景描述】 130
【學習目標】 131
【模塊任務】 131
任務5-1人PD-L1免疫動物的準備 131
● 必備知識 131
一、單克隆抗體的概念 131
二、雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體的基本原理 132
三、雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體的主要過程 132
四、動物免疫 132
● 操作規(guī)程 133
人PD-L1免疫小鼠的準備 133
任務5-2骨髓瘤細胞和脾細胞的融合與篩選 135
● 必備知識 135
一、脾細胞、骨髓瘤細胞及飼養(yǎng)細胞的準備 135
二、細胞融合和雜交瘤細胞的篩選 136
● 操作規(guī)程 138
骨髓瘤細胞與脾細胞的融合（PEG融合法） 138
任務5-3抗人PD-L1雜交瘤細胞的篩選 140
● 必備知識 140
一、酶聯(lián)免疫吸附法 140
二、雙向擴散法 141
● 操作規(guī)程 142
酶聯(lián)免疫吸附法篩選陽性雜交瘤細胞 142
任務5-4抗人PD-L1雜交瘤細胞的單克隆化 143
● 必備知識 143
一、有限稀釋法 144
二、軟瓊脂平板法 144
三、顯微鏡操作法 144
四、流式細胞熒光分選技術(shù) 144
● 操作規(guī)程 145
有限稀釋法單克隆化陽性雜交瘤細胞 145
【拓展知識】 146
一、雜交瘤技術(shù)的誕生 146
二、雜交瘤細胞株的凍存和復蘇 147
三、單克隆抗體的大量制備與純化 147
四、細胞的基因轉(zhuǎn)染技術(shù) 148
【鞏固提升】 151
一、鞏固練習 151
二、進階訓練 152

模塊六植物細胞的懸浮培養(yǎng) 153
【背景描述】 153
【學習目標】 153
【模塊任務】 154
任務6-1MS培養(yǎng)基的制備 154
● 必備知識 154
一、植物組織和細胞培養(yǎng)的基本概念 154
二、植物細胞培養(yǎng)的實驗室條件 157
三、植物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基 162
● 操作規(guī)程 169
MS培養(yǎng)基的配制和滅菌 169
任務6-2胡蘿卜愈傷組織的誘導 172
● 必備知識 172
一、外植體的選擇和預處理 172
二、植物愈傷組織的形成過程 174
三、植物愈傷組織培養(yǎng)的一般程序 175
四、植物組織細胞培養(yǎng)的無菌操作 176
● 操作規(guī)程 176
胡蘿卜愈傷組織的誘導和繼代 176
任務6-3胡蘿卜細胞的懸浮培養(yǎng) 177
● 必備知識 178
一、單細胞的分離 178
二、懸浮培養(yǎng)細胞的生長和測定 179
三、植物細胞懸浮培養(yǎng)方式 180
四、懸浮培養(yǎng)細胞的同步化 182
五、植物細胞培養(yǎng)的環(huán)境條件 183
● 操作規(guī)程 185
胡蘿卜懸浮細胞系的建立與繼代 185
【拓展知識】 186
一、植物組織細胞培養(yǎng)的發(fā)展史 186
二、植物組織細胞培養(yǎng)的應用 188
三、植物細胞的固定化培養(yǎng) 190
四、植物單細胞培養(yǎng) 192
【鞏固提升】 195
一、鞏固練習 195
二、進階訓練 196

附錄細胞培養(yǎng)技術(shù)常用術(shù)語中英文對照 197

參考文獻 201